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樣品RNA的制備

更新時(shí)間:2025-04-09      點(diǎn)擊次數(shù):195
黃頭病毒(Yellow Head Virus,YHV)是一種RNA病毒,黃頭病是對(duì)蝦的主要病害之一,病毒感染的靶器官為蝦的鰓、觸角腺、造血組織、淋巴器官等。病蝦發(fā)病初期攝食量增加,然后突然停止吃食,在2~4天內(nèi)會(huì)出現(xiàn)臨床現(xiàn)象并死亡。許多瀕臨死亡的蝦聚集在池塘角落的水面附近,其頭胸甲因里面的干胰腺發(fā)黃而變成黃色,對(duì)蝦體色發(fā)白,鰓棕色或白色,瀕臨死亡的蝦其外胚層和中胚層發(fā)源的器官會(huì)出現(xiàn)全身性的壞死,已納入世界衛(wèi)生組織規(guī)定之檢疫傳染病之一,因此快速準(zhǔn)確鑒定對(duì)該病的預(yù)防和檢疫有著重要作用。本產(chǎn)品基于PCR原理開(kāi)發(fā)。它具有下列特點(diǎn):
1.一站式,用于不需要單獨(dú)準(zhǔn)備每種成分,包括引物和對(duì)照。
2.根據(jù)黃頭病毒的保守基因序列設(shè)計(jì)的引物,具有良好的特異性。
3.基于染料法qRT-PCR檢測(cè),靈敏度比常規(guī)RT-PCR高10-100倍,可以達(dá)到至少1000拷貝/反應(yīng)。
4.使用一管式qRT-PCR技術(shù),RT和PCR兩步在一個(gè)試管內(nèi)完成,不需要中間轉(zhuǎn)移樣品,降低了操作誤差和可能的污染。
5.本產(chǎn)品足夠50次30μL體系的RT-PCR,只能用于科研,不能用于臨床。
樣品RNA的制備:
如果有N個(gè)樣品,必須設(shè)置N+2個(gè)提取,多出的一個(gè)是PC(樣品制備陽(yáng)性對(duì)照),一個(gè)是NC(樣品制備陰性對(duì)照)??梢杂?0μL上步制備的陽(yáng)性對(duì)照梯度稀釋液中的第4號(hào)(濃度為1×10E4拷貝/μL,10μL相當(dāng)于1萬(wàn)拷貝)再加上一定量的水作為制備的陽(yáng)性對(duì)照(加水后其總體積跟樣品一樣,樣品體積多少取決于所用試劑盒的要求)??梢杂盟鳛橹苽涞年幮詫?duì)照。
用自選方法純化N+2個(gè)樣品的RNA,本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)病毒RNA提取試劑盒兼容。
 
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