无码人妻精品一区二区三区9厂_久久狠狠色噜噜狠狠狠狠97_浪荡女天天不停挨cao日常视频_国产精品成人aaaaa网站_精品一区二区三区自拍图片区

您好!歡迎訪問優(yōu)利科(上海)生命科學(xué)有限公司網(wǎng)站!
全國服務(wù)咨詢熱線:

15021281375

當(dāng)前位置:首頁 > 資料下載 > 谷氨酸合成酶(GOGAT)試劑盒說明書

谷氨酸合成酶(GOGAT)試劑盒說明書

發(fā)布時間:2023/4/5      點(diǎn)擊次數(shù):413

谷氨酸合成酶(Glutamate synthase,GOGAT)試劑盒說明書

                                         微量法100/96

    意:正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

測定意義:                          

GOGAT廣泛分布于植物中,和谷氨酰胺合成酶共同構(gòu)成GS/GOGAT循環(huán),參與氨同化的調(diào)控。

 

測定原理:

GOGAT催化谷氨酰胺的氨基轉(zhuǎn)移到α-酮戊二酸,形成兩分子的谷氨酸;同時NADH氧化生成NAD+,340nm吸光度的下降速率可以反映GOGAT活性大小。

 

需自備的儀器和用品:

紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

 

試劑組成和配制:

提取液:液體100mL×1瓶,4保存;

試劑一:液體20mL×1瓶,4保存;

試劑二:粉劑×2,4保存;

 

粗酶液提?。?/span>

細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);8000g 4離心10min,取上清,置冰上待測。

組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4離心10min,取上清,置冰上待測。

 

測定步驟:

1、  分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至340nm,蒸餾水調(diào)零。

2、  樣本測定

(1)在試劑二中加入9mL試劑一充分溶解混勻,置于37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)水浴5min;

 

現(xiàn)配現(xiàn)用(配好后3h內(nèi)用完)

2)在微量石英比色皿或96孔板中加入20μL樣本和180μL試劑二,混勻,立即記錄340nm20s時的吸光值A1 5min20s后的吸光值A2,計(jì)算ΔA=A1-A2。

GOGAT活性計(jì)算:

a.用微量石英比色皿測定的計(jì)算公式如下

1)按樣本蛋白濃度計(jì)算:

單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘消耗1 nmolNADH定義為一個酶活力單位。

GOGATnmol/min/mg prot)=[ΔA×V反總÷ε×d×109]÷(V×Cpr) ÷T=321×ΔA÷Cpr

2)按樣本鮮重計(jì)算:

單位的定義:每g組織每分鐘消耗1 nmol NADH定義為一個酶活力單位。

GOGATnmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V反總÷ε×d×109]÷(W ×V÷V樣總) ÷T=321×ΔA÷W

3)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算:

單位的定義:每1萬個細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗1 nmol NADH定義為一個酶活力單位。

GOGATnmol/min/104 cell)=[ΔA×V反總÷ε×d×109]÷(500×V÷V樣總) ÷T=0.642×ΔA

V反總:反應(yīng)體系總體積,2×10-4 LεNADH摩爾消光系數(shù),6.22×103 L / mol /cmd:比色皿光徑,1cm;V樣:加入樣本體積,0.02 mLV樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時間,5 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mLW:樣本質(zhì)量,g500:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),500萬。

 

b.96孔板測定的計(jì)算公式如下

1)按樣本蛋白濃度計(jì)算:

單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘消耗1 nmolNADH定義為一個酶活力單位。

GOGATnmol/min/mg prot)=[ΔA×V反總÷ε×d×109]÷(V×Cpr) ÷T=643×ΔA÷Cpr

2)按樣本鮮重計(jì)算:

單位的定義:每g組織每分鐘消耗1 nmol NADH定義為一個酶活力單位。

GOGATnmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V反總÷ε×d×109]÷(W× V÷V樣總) ÷T=643×ΔA÷W

3)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算:

單位的定義:每1萬個細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗1 nmol NADH定義為一個酶活力單位。

GOGATnmol/min/104 cell)=[ΔA×V反總÷ε×d×109]÷(500×V÷V樣總)÷T=1.286×ΔA

V反總:反應(yīng)體系總體積,2×10-4 L;εNADH摩爾消光系數(shù),6.22×103 L / mol /cmd96孔板光徑,0.5cm;V樣:加入樣本體積,0.02 mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時間,5 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g500:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),500萬。


文件下載    圖片下載    
優(yōu)利科(上海)生命科學(xué)有限公司
地址:金大公路8218號1幢
郵箱:1431486511@qq.com
傳真:
關(guān)注我們
歡迎您關(guān)注我們的微信公眾號了解更多信息:
歡迎您關(guān)注我們的微信公眾號
了解更多信息
免费看一区二区三区四区| 久久亚洲av永久无码精品| 毛片无码一区二区三区a片视频| 国产在线国偷精品产拍| 日韩精品无码一区二区三区av| 国产精品无码天天爽视频| 欧洲女人牲交视频免费| 久久久亚洲精品一区二区三区| 中文字幕亚洲一区二区三区| 国产av夜夜欢一区二区三区| 少妇太爽了在线观看免费视频| 欧美大屁股熟妇bbbbbb| 国产手机在线αⅴ片无码观看| 欧美国产综合欧美视频| 亚洲精品久久婷婷丁香51| 人人做人人爽人人爱| 久久精品午夜一区二区福利| 中文字幕丰满乱子伦无码专区| 国精产品一区一区三区有限在线| 久久久噜噜噜久久中文字幕色伊伊| 亚洲va中文字幕无码毛片| 美女国产毛片a区内射| 日本少妇高潮喷水xxxxxxx| 欧美巨鞭大战丰满少妇| 亚洲一区二区三区国产精华液| 又色又爽又高潮免费观看| 国产午夜精品一区理论片飘花| 国产伦精品一区二区三区免费| 国产偷窥熟女精品视频| 久久久久夜夜夜精品国产| 日韩一欧美内射在线观看| 国产jk精品白丝av在线观看| 欧美内射深喉中文字幕| 人妻无码熟妇乱又伦精品视频| 亚洲天堂2017无码| 国产自产v一区二区三区c| 亚洲色无码专区在线观看| 国产午夜人做人免费视频| 色婷婷av一区二区三区之红樱桃| 亚洲av狠狠爱一区二区三区| 国产精品久久久久久|