无码人妻精品一区二区三区9厂_久久狠狠色噜噜狠狠狠狠97_浪荡女天天不停挨cao日常视频_国产精品成人aaaaa网站_精品一区二区三区自拍图片区

您好!歡迎訪問(wèn)優(yōu)利科(上海)生命科學(xué)有限公司網(wǎng)站!
全國(guó)服務(wù)咨詢(xún)熱線(xiàn):

15021281375

當(dāng)前位置:首頁(yè) > 資料下載 > 還原型谷胱甘肽(reduced glutathione, GSH)試劑盒說(shuō)明書(shū)

還原型谷胱甘肽(reduced glutathione, GSH)試劑盒說(shuō)明書(shū)

發(fā)布時(shí)間:2023/10/16      點(diǎn)擊次數(shù):370

還原型谷胱甘肽(reduced glutathione, GSH)試劑盒說(shuō)明書(shū)

 微量法100T/96S

 

注    意:正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

測(cè)定意義:

GSH是細(xì)胞內(nèi)最主要的抗氧化巰基物質(zhì),在抗氧化、蛋白質(zhì)巰基保護(hù)和氨基酸跨膜運(yùn)輸?shù)戎芯哂兄匾饔?。還原型與氧化型比值(GSH/GSSG)是細(xì)胞氧化還原狀態(tài)的主要?jiǎng)討B(tài)指標(biāo)。因此,測(cè)定細(xì)胞內(nèi)GSH和GSSG含量以及GSH/GSSG比值,能夠很好地反映細(xì)胞所處的氧化還原狀態(tài)。

 

測(cè)定原理:

DTNB與GSH反應(yīng)生成復(fù)合物,在412nm處有特征吸收峰;其吸光度與GSH含量成正比。

 

自備儀器和用品:

低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)節(jié)移液器、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96孔板、和蒸餾水。

 

試劑組成和配制:

試劑一:液體×1瓶,4℃保存。

試劑二:液體×1瓶,4℃保存。

試劑三:液體×1瓶,4℃避光保存。

 

粗酶液提?。?/p>

1.        組織:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱(chēng)取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進(jìn)行冰浴勻漿。8000g,4℃離心10min,取上清置冰上待測(cè)。

2.        細(xì)菌、真菌:按照細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1mL試劑一),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時(shí)間3min);然后8000g,4℃,離心10min,取上清置于冰上待測(cè)。

3.        血清等液體:直接測(cè)定。

GSH測(cè)定操作:

1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到412 nm,蒸餾水調(diào)零。

2. 試劑二置于25℃(一般物種)或者37℃(哺乳動(dòng)物)水浴中保溫30min。

3. 空白管:取微量玻璃比色皿或96孔板,依次加入20μL蒸餾水,140μL試劑二,40μL試劑三,混勻靜置2min后測(cè)定412 nm吸光度A1。

4. 測(cè)定管:取微量玻璃比色皿或96孔板,依次加入20μL上清液,140μL試劑二,40μL試劑三,混勻靜置2min后測(cè)定412 nm吸光度A2。

注意:空白管只需要測(cè)定一次。

 

GSH含量計(jì)算公式:

GSH標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)公式:y=1.5 x(x為GSH濃度,μ mol /mL;y為吸光值)

a.使用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

(1)按蛋白濃度計(jì)算

 

GSH(μ mol/ mg prot)=(A2-A1) ÷1.5×V樣÷(V樣×Cpr) =0.667×(A2-A1) ÷Cpr

(2)按樣本質(zhì)量計(jì)算

GSH(μ mol/g 鮮重)=(A2-A1) ÷1.5×V樣÷(V樣÷V樣總×W)=0.667×(A2-A1) ÷W

(3)按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

GSH(μ mol /104 cell)=(A2-A1) ÷1.5×V樣÷(V樣÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量)=0.667×(A2-A1) ÷細(xì)胞數(shù)量

(4)按液體體積計(jì)算

GSH(μ mol/ mL)=(A2-A1) ÷1.5×V樣÷V樣 =0.667×(A2-A1)

V反總:反應(yīng)總體積,0.2mL;V樣總:上清液總體積,1 mL;V樣:加入反應(yīng)體系中上清液體積,20μL=0.02 mL;Cpr:上清液蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣品質(zhì)量

 

b.使用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

GSH標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)公式:y=0.75x(x為GSH濃度,μ mol /mL;y為吸光值)

(1)按蛋白濃度計(jì)算

GSH(μ mol/ mg prot)=(A2-A1) ÷0.75×V樣÷V樣÷Cpr =1.334×(A2-A1) ÷Cpr

(2)按樣本鮮重計(jì)算

GSH(μ mol/g 鮮重)=(A2-A1) ÷0.75×V樣÷(V樣÷V樣總×W)=1.334×(A2-A1) ÷W

(3)按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

GSH(μ mol /104 cell)=(A2-A1) ÷0.75×V樣÷(V樣÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量)=1.334×(A2-A1) ÷細(xì)胞數(shù)量

(4)按液體體積計(jì)算

GSH(μ mol/ mL)=(A2-A1) ÷0.75×V反總÷V樣 =1.334×(A2-A1)

V樣總:上清液總體積,1mL;V樣:加入反應(yīng)體系中上清液體積,20μL=0.02 mL;Cpr:上清液蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣品質(zhì)量,g。

 

注意事項(xiàng):

1.        試劑一中含有蛋白質(zhì)沉淀劑,因此上清液不能用于蛋白濃度測(cè)定。

2.        Z低檢出限為0.011mmol/L。


文件下載    圖片下載    
優(yōu)利科(上海)生命科學(xué)有限公司
地址:金大公路8218號(hào)1幢
郵箱:1431486511@qq.com
傳真:
關(guān)注我們
歡迎您關(guān)注我們的微信公眾號(hào)了解更多信息:
歡迎您關(guān)注我們的微信公眾號(hào)
了解更多信息
中文字幕精品无码一区二区| 国产人妻大战黑人20p| h漫全彩纯肉无码网站| 成人做爰视频www| 久久亚洲精品国产亚洲老地址| 亚洲爆乳大丰满无码专区| 一本一道久久a久久精品综合| 免费看少妇作爱视频| 精品国产免费人成网站| 插插射啊爱视频日a级| 伊伊人成亚洲综合人网7777| 无码日韩精品一区二区三区免费| 18禁裸体女免费观看| 久久久无码人妻精品一区| 亚洲av无码专区国产不卡顿| 亚洲精品无码专区久久久| 在教室伦流澡到高潮hgl动漫| 亚洲乱码中文字幕久久孕妇黑人| 精品久久久久久久久中文字幕| 国产成人a人亚洲精品无码| 成人丝袜激情一区二区| 欧美大肥婆大肥bbbbb| 亚洲欧洲∨国产一区二区三区| 精品欧美乱码久久久久久1区2区| 少妇精品导航| 日本边添边摸边做边爱的网站| 自拍亚洲一区欧美另类| 亚洲午夜av久久久精品影院色戒| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 黑人巨茎大战白人美女| 久久97精品久久久久久久不卡| 欧美mv日韩mv国产网站app| 无码人妻丰满熟妇a片护士| 蜜臀亚洲av无码精品国产午夜.| 午夜伦4480yy私人影院| 无码人妻丝袜在线视频| 精品亚洲麻豆1区2区3区| 国产精品国产三级国产av主播| 久久99久久99精品中文字幕| 久久婷婷五月综合色国产| 亲嘴扒胸摸屁股激烈网站|