无码人妻精品一区二区三区9厂_久久狠狠色噜噜狠狠狠狠97_浪荡女天天不停挨cao日常视频_国产精品成人aaaaa网站_精品一区二区三区自拍图片区

您好!歡迎訪問優(yōu)利科(上海)生命科學(xué)有限公司網(wǎng)站!
全國(guó)服務(wù)咨詢熱線:

15021281375

當(dāng)前位置:首頁 > 資料下載 > 己糖激酶(hexokinase,HK)試劑盒說明書

己糖激酶(hexokinase,HK)試劑盒說明書

發(fā)布時(shí)間:2023/10/24      點(diǎn)擊次數(shù):390

己糖激酶(hexokinase,HK)試劑盒說明書

                                          微量法 100/96

 

   正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

測(cè)定意義

HKEC 2.7.1.1)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,是葡萄糖分解過程中的第一個(gè)關(guān)鍵酶,催化葡萄糖轉(zhuǎn)化為6-磷酸葡萄糖,6-磷酸葡萄糖是糖酵解和磷酸戊糖途徑的交叉點(diǎn)。

 

測(cè)定原理

HK催化葡萄糖合成6-磷酸葡萄糖,6-磷酸葡萄糖脫氫酶進(jìn)一步催化6-磷酸葡萄糖脫氫生成NADPH,NADPH340nm有特征吸收峰。

 

需自備的儀器和用品

紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、恒溫水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

 

試劑的組成和配制

提取液:100mL×1瓶,4保存;

試劑一:液體20mL×1瓶, 4保存;

試劑二:粉劑×1瓶,4保存;

試劑三:粉劑×1支,-20保存;

 

樣本的前處理

1、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);8000g 4離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。

2、組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。

3、血清(漿)樣品:直接檢測(cè)。

 

測(cè)定步驟

1、  分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340nm,蒸餾水調(diào)零。

2、  樣本測(cè)定

1)在試劑二中加入18mL試劑一充分溶解,置于37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其它物種)水浴5min;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。

2)在試劑三中加入1mL試劑一,充分溶解待用;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。

3)在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL樣本、10μL試劑三和180μL試劑二,混勻,立即記錄340nm20s時(shí)的吸光值A1 5min20s后的吸光值A2計(jì)算ΔA=A2-A1。

注意:不同勻漿組織中HK活力不一樣,做正式試驗(yàn)之前請(qǐng)做1-2只預(yù)試,若ΔA>0.5,則說明組織活力太

 

高,必須用提取液稀釋成適當(dāng)濃度勻漿上清液(計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)),或縮短反應(yīng)時(shí)間至2min,使ΔA<0.5,以提高檢測(cè)靈敏度。

 

HK活性計(jì)算

a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

1、血清(漿)HK活性

單位的定義:每毫升血清(漿)在每分鐘生成1 nmolNADPH定義為一個(gè)酶活力單位。

HKnmol/min/mL)=[ΔA×V反總÷ε×d×109]÷V÷T=643×ΔA

2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中HK活性

1)按樣本蛋白濃度計(jì)算

單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmolNADPH定義為一個(gè)酶活力單位。

HKnmol/min/mg prot)=[ΔA×V反總÷ε×d×109]÷(V×Cpr) ÷T=643×ΔA÷Cpr

2)按樣本鮮重計(jì)算

單位的定義:每g組織每分鐘生成1 nmolNADPH定義為一個(gè)酶活力單位。

HKnmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V反總÷ε×d×109]÷(W ×V÷V樣總) ÷T=643×ΔA÷W

3)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算

單位的定義:每1萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘生成1 nmolNADPH定義為一個(gè)酶活力單位。

HKnmol/min/104 cell)=[ΔA×V反總÷ε×d×109]÷(500×V÷V樣總) ÷T=1.286×ΔA

V反總:反應(yīng)體系總體積,2×10-4 L;εNADPH摩爾消光系數(shù),6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V樣:加入樣本體積,0.01 mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時(shí)間,5 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;500:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),500萬。

 

b.96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

1、血清(漿)HK活性

單位的定義:每毫升血清(漿)在每分鐘生成1 nmolNADPH定義為一個(gè)酶活力單位。

HKnmol/min/mL)=[ΔA×V反總÷ε×d×109]÷V÷T=1286×ΔA

2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中HK活性

1)按樣本蛋白濃度計(jì)算

單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmolNADPH定義為一個(gè)酶活力單位。

HKnmol/min/mg prot)=[ΔA×V反總÷ε×d×109]÷(V×Cpr) ÷T=1286×ΔA÷Cpr

2)按樣本鮮重計(jì)算

單位的定義:每g組織每分鐘生成1 nmolNADPH定義為一個(gè)酶活力單位。

HKnmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V反總÷ε×d×109]÷(W× V÷V樣總) ÷T=1286×ΔA÷W

3)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算

單位的定義:每1萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘生成1 nmolNADPH定義為一個(gè)酶活力單位。

HKnmol/min/104 cell)=[ΔA×V反總÷ε×d×109]÷(500×V÷V樣總)÷T=2.572×ΔA

V反總:反應(yīng)體系總體積,2×10-4 L;εNADPH摩爾消光系數(shù),6.22×103 L / mol /cm;d96孔板光徑,0.5cm;V樣:加入樣本體積,0.01 mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時(shí)間,5 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g500:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),500萬。


文件下載    圖片下載    
優(yōu)利科(上海)生命科學(xué)有限公司
地址:金大公路8218號(hào)1幢
郵箱:1431486511@qq.com
傳真:
關(guān)注我們
歡迎您關(guān)注我們的微信公眾號(hào)了解更多信息:
歡迎您關(guān)注我們的微信公眾號(hào)
了解更多信息
欧美色就是色| 人妻 日韩 欧美 综合 制服| 精品99日产一卡2卡三卡4| 亚洲成av人片在线观看www| 久久精品国产亚洲av高清热| 国产亚洲精品久久久久久久软件| 久久精品夜色国产亚洲av| 亚洲精品一区二三区不卡| 日韩一区二区三区北条麻妃| 97香蕉碰碰人妻国产欧美| 亚洲欧美综合区丁香五月小说| 级毛片内射视频| 欧美老妇疯狂xxxxbbbb| 亚洲成a人无码| 无码人妻久久一区二区三区免费丨| 欧美高清在线精品一区| 日本一卡2卡3卡四卡精品网站| 欧美va亚洲va在线观看| 久久综合给合久久狠狠狠97色| 最近中文字幕在线看免费完整版| 久久综合精品国产一区二区三区无码| 国产精品久久久久久久久久久久午衣片| 日本疯狂爆乳xxxx| 天天综合色天天综合色h| 日本免费一区二区三区| 精品少妇一区二区三区免费观| 亚洲国产精彩中文乱码av| 国产精品美女久久久久| 亚洲av无码成人精品国产| 美女av一区二区三区| 九九影院午夜理论片少妇| 色综合久久久无码中文字幕波多| 无线日本视频精品| 亚洲中文字幕无码永久在线| 80s国产成年女人毛片| 亚洲一区二区三区四区五区黄| 人妻无码熟妇乱又伦精品视频| 日日日日做夜夜夜夜做无码| 中文无码一区二区不卡αv| 熟妇人妻av无码一区二区三区| 女人18毛片a级毛片免费视频|