銅藍(lán)蛋白(Ceruloplasmin，Cp)測(cè)定試劑盒說明書

                                                  微量法100T/48S

注    意：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

測(cè)定意義：

銅藍(lán)蛋白是血漿的含銅蛋白，有運(yùn)輸銅的功能，同時(shí)具有氧化酶的活性，是細(xì)胞外液重要的抗氧化劑。

測(cè)定原理:

銅藍(lán)蛋白催化3,3’,5,5’-四甲基聯(lián)苯胺生成藍(lán)色產(chǎn)物，在645nm處有特征吸收峰，依此可得銅藍(lán)蛋白活性。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器:

天平、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。

試劑組成和配制:

試劑一：液體10mL×1瓶，4℃保存。

試劑二：液體7mL×1瓶，4℃保存。

試劑三：液體15mL×1瓶，4℃避光保存。（使用前37℃預(yù)熱）

樣本前處理：

1、   血清（漿）等液體樣本：直接檢測(cè)。

2、   動(dòng)植物組織樣本：稱取約0.1g組織，加入1mL蒸餾水，進(jìn)行冰浴勻漿。10000g ，4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。

測(cè)定操作表:

1、   分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至645nm，蒸餾水調(diào)零。

2、   操作表

計(jì)算公式:

a.        用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

1.按體積計(jì)算

酶活定義:37℃條件下， 每分鐘每毫升樣品與底物作用吸光度升高0.01為一個(gè)酶活單位。

Cp活力（U/mL）=ΔA×V反總÷0.01÷V樣÷T = 33.33×ΔA

2.按鮮重計(jì)算

單位定義：37℃條件下，每分鐘每克樣品與底物作用吸光值升高0.01為一個(gè)酶活單位。

Cp活力（U/g鮮重）=ΔA×V反總÷0.01÷（W×V樣÷V樣總）÷T = 33.33×ΔA÷W

3.按蛋白濃度計(jì)算

單位定義：37℃條件下，每分鐘每毫克蛋白樣品與底物作用吸光值升高0.01為一個(gè)酶活單位。

Cp活力（U/ mg prot）=ΔA×V反總÷0.01÷（Cpr×V樣）÷T = 33.33×ΔA÷Cpr

V樣：0.03 mL；V反總：0.3 mL；T：反應(yīng)時(shí)間，30min；V樣總：加入提取液體積，1mL； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g

b.       用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

1、   按體積計(jì)算

酶活定義:37℃條件下， 每分鐘每毫升樣品與底物作用吸光度升高0.005為一個(gè)酶活單位。

Cp活力（U/mL）=ΔA×V反總÷0.005÷V樣÷T = 66.66×ΔA

2、   按鮮重計(jì)算

單位定義：37℃條件下，每分鐘每克樣品與底物作用吸光值升高0.005為一個(gè)酶活單位。

Cp活力（U/g鮮重）=ΔA×V反總÷0.005÷（W×V樣÷V樣總）÷T = 66.66×ΔA÷W

3、   按蛋白濃度計(jì)算

單位定義：37℃條件下，每分鐘每毫克蛋白樣品與底物作用吸光值升高0.005為一個(gè)酶活單位。

Cp活力（U/ mg prot）=ΔA×V反總÷0.005÷（Cpr×V樣）÷T = 66.66×ΔA÷Cpr

V樣：0.03 mL；V反總：0.3 mL；T：反應(yīng)時(shí)間，30min；V樣總：加入提取液體積，1mL； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g

注意事項(xiàng):

試劑二和試劑三有一定的毒性和刺激性，請(qǐng)操作時(shí)做好防護(hù)措施。