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脂肪酸合成酶(FAS)活性試劑盒

簡要描述:脂肪酸合成酶(FAS)活性試劑盒測定意義:
FAS 是脂肪酸合成關(guān)鍵酶,催化乙酰輔酶 /A 和丙二酰輔酶 /A 而生成長鏈脂肪酸。FAS 普遍表達(dá)于各種組織細(xì)胞中,在哺乳動物肝、腎、腦、肺和乳腺以及脂肪組織中表達(dá)豐富。

  • 更新時間:2024-06-29
  • 廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
  • 生產(chǎn)地址:上海
  • 訪  問  量:689

詳細(xì)介紹

品牌YLKBIOCAS詳見說明書
分子式詳見說明書純度詳見說明書
分子量詳見說明書貨號YLK-SH129
規(guī)格100管/96樣、50管/48樣、25管/24樣供貨周期現(xiàn)貨
主要用途科研應(yīng)用領(lǐng)域化工,生物產(chǎn)業(yè)
測定方法:微量法、紫外分光光度法

脂肪酸合成酶(FAS)活性試劑盒說明書

 

微量法100T/96S

 

 

  意:正式測定之前選擇 2-3 個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。

 

 

測定意義:

 

FAS 是脂肪酸合成關(guān)鍵酶,催化乙酰輔酶 /A 和丙二酰輔酶/ A 而生成長鏈脂肪酸。FAS 普遍表達(dá)于各種組織細(xì)胞中,在哺乳動物肝、腎、腦、肺和乳腺以及脂肪組織中表達(dá)豐富。

 

 

測定原理:

 

FAS 催化乙酰 CoA、丙二酰 CoA NADPH 生成長鏈脂肪酸和 NADP+;NADPH 340nm 有吸收峰,而 NADP+沒有;通過測定 340nm 光吸收下降速率,計算 FAS 活性。

自備儀器和用品:

 

研缽、冰、臺式離心機、紫外分光光度計/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板、可調(diào)式移液槍和蒸餾水。

 

 

試劑組成和配制:

 

試劑一:液體 100mL×1 瓶,-20保存。用前 1d 取出置于 4充分解凍后混勻。

 

試劑二:粉劑×1 瓶。臨用前加入440μL試劑四,充分溶解,用不完的試劑分裝后-20保存,禁止反復(fù)凍融。

 

試劑三:粉劑×1 瓶,4保存。臨用前加入440μL試劑四,充分溶解,用不完的試劑分裝后-20保存,禁止反復(fù)凍融。

 

試劑四:液體 20mL×1 , 4保存。

 

試劑五:粉劑×1 瓶,4保存。臨用前加入 840μL試劑四,充分溶解,用不完的試劑分裝后-20保存,禁止反復(fù)凍融。

 

 

粗酶液提取:

 

1.        組織:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL) 15~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 試劑一)進(jìn)行冰浴勻漿。12000g4離心 40min,取上清置冰上待測。

 

2.        細(xì)菌、真菌:按照細(xì)胞數(shù)量(104 個):試劑一體積(mL)為 500~10001 的比例(建議 500 萬細(xì)胞加入 1mL 試劑一),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率 300w,超聲 3 秒,間隔 7 秒,總時間 3min);然后 12000g4,離心 40min,取上清置于冰上待測。

 

3.        血清等液體:直接測定。

 

 

FAS 測定操作:

 

1.    分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min,調(diào)節(jié)波長到 340 nm,蒸餾水調(diào)零。

 

2.    試劑四置于 40水浴中預(yù)熱 30 min。

 

3.     96 孔板或 EP 管中依次加入 20μL 上清液、4μL 試劑二、4μL 試劑三、164μL 試劑四和 8μL 試劑五,混勻后于 340nm 處測定吸光值,記錄第 30s 90s 時吸光值,分別記錄為 A1

A2。 A =A1-A2。

 

 

 

 

FAS 活性計算:

 

a.使用微量石英比色皿測定的計算公式如下

 

1)按照蛋白濃度計算

 

活性單位定義:37中每毫克蛋白每分鐘氧化 1nmol NADPH 1 個酶活單位。 FAS(nmol/min/mg prot) =(A÷ε÷d×V 反總×109) ÷(Cpr×V )÷T

 

=1608×A÷Cpr

 

2)按照樣本質(zhì)量計算

 

活性單位定義:37中每克組織每分鐘氧化 1nmol NADPH 1 個酶活單位。

 

 

FAS(nmol/min/g 鮮重) = (△A÷ε÷d×V 反總×109) ÷(W×V ÷V 樣總)÷T =1608×A ÷W

 

3)按細(xì)胞數(shù)量計算

 

活性單位定義:37中每 104 個細(xì)胞每分鐘氧化 1nmol NADPH 1 個酶活單位。

 

FAS(nmol /min/104cell) = (△A÷ε÷d×V 反總×109) ÷(細(xì)胞數(shù)量×V ÷V 樣總)÷T =1608×A ÷細(xì)胞數(shù)量

 

4)按液體體積計算

 

活性單位定義:37中每毫升樣本每分鐘氧化 1nmol NADPH 1 個酶活單位。

 

FAS(nmol /min/mL) =(△A÷ε÷d×V 反總×109) ÷V ÷T =1608×A

 

εNADPH 摩爾消光系數(shù),6.22×103L/mol/cm;d:比色皿光徑,1 cm;V 反總:反應(yīng)體系

總體積,200μL=2×10-4L;Cpr:上清液蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W :樣品質(zhì)量;V 樣:加入

 

反應(yīng)體系中上清液體積,20μL=0.02 mLV 樣總:提取液體積,1 mLT:反應(yīng)時間,1min。

 

b.使用 96 孔板測定的計算公式如下

 

1)按照蛋白濃度計算

 

活性單位定義:37中每毫克蛋白每分鐘氧化 1nmol NADPH 1 個酶活單位。

 

FAS(nmol/min/mg prot) =(A÷ε÷d×V 反總×109)÷(Cpr×V )÷T =3216×A÷Cpr

 

2)按照樣本質(zhì)量計算

 

活性單位定義:37中每克組織每分鐘氧化 1nmol NADPH 1 個酶活單位。

9

 

=3216×A÷W

 

3)按細(xì)胞數(shù)量計算

 

活性單位定義:37中每 104 個細(xì)胞每分鐘氧化 1nmol NADPH 1 個酶活單位。

 

FAS(nmol /min/104cell) = (△A÷ε÷d×V 反總×109)÷(細(xì)胞數(shù)量×V ÷V 樣總)÷T =3216×細(xì)胞數(shù)量

 

4)按液體體積計算

 

活性單位定義:37中每毫升樣本每分鐘氧化 1nmol NADPH 1 個酶活單位。

 

FAS(nmol /min/mL) =(△A÷ε÷d×V 反總×109 )÷V ÷T =3216×A

 

εNADPH 摩爾消光系數(shù),6.22×103L/mol/cm;d96 孔板光徑,0.5 cmV 反總:反應(yīng)體系總體積,200μL=2×10-4L;Cpr:上清液蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W :樣品質(zhì)量;V 樣:加入反應(yīng)體系中上清液體積,20μL=0.02 mL;V 樣總:提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時間,1min。

脂肪酸合成酶(FAS)活性試劑盒僅供科研!

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