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鼠疫耶爾森菌探針法熒光定量PCR試劑盒

簡要描述:鼠疫耶爾森菌探針法熒光定量PCR試劑盒鼠疫耶爾森菌也叫做鼠疫桿菌(Yersiniapestis)是鼠疫的病原菌,鼠疫是一種人獸共患的自然疫源性烈性傳染病,人類鼠疫多為疫鼠的跳蚤叮咬而感染, 是我國法定的甲類傳染病。

  • 更新時間:2024-07-18
  • 廠商性質:生產廠家
  • 生產地址:上海
  • 訪  問  量:658

詳細介紹

品牌YLKBIO貨號YLK10406P
規(guī)格50T供貨周期現(xiàn)貨
主要用途科研實驗應用領域化工,生物產業(yè)
保存條件低溫運輸,-20℃保存有效期12個月
試劑盒說明不同批號的試劑盒組分不可交互使用

鼠疫耶爾森菌探針法熒光定量PCR試劑盒


產品名稱:鼠疫耶爾森菌探針法熒光定量PCR試劑盒

英文名稱:YersiniapestisProbe qPCR Kit

鼠疫耶爾森菌也叫做鼠疫桿菌(Yersiniapestis)是鼠疫的病原菌,鼠疫是一種人獸共患的自然疫源性烈性傳染病,人類鼠疫多為疫鼠的跳蚤叮咬而感染,  是我國法定的甲類傳染病。此菌引起的是嚙齒動物中的自然疫源性疾病,傳染性強,病死率高,易釀成大流行,此菌主要累及皮膚和淋巴結,其次為敗血癥、肺炎、腦膜炎,對人體健康有較大危害,因此快速檢測鼠疫耶爾森菌(鼠疫桿菌)具  有重要意義。本產品就是以探針法熒光定量 PCR 技術為基礎開發(fā)的專門檢測鼠疫耶爾森菌(鼠疫桿菌)的試劑盒,它具有下列特點:

1.       即開即用,用戶只需要提供樣品 DNA 模板。

2.       引物和探針經過優(yōu)化,靈敏性高。

3.       提供陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品。

4.       特異性高,引物是根據(jù)鼠疫耶爾森菌(鼠疫桿菌)高度保守區(qū)設計,不會跟其 他病原 DNA 發(fā)生交叉反應。

5.       本產品足夠 50 次 20μL 體系的探針法熒光定量 PCR 反應。

6.       本產品只能用于科研。


【試劑組成】

成分

包裝

2×Probe qPCR MagicMix

500 μL(本色蓋)

熒光PCR 專用模板稀釋液

1 mL(黃

鼠疫耶爾森菌探針法qPCR 引物混合液

100 μL白蓋

鼠疫耶爾森菌 qPCR 探針

50 μL棕色管)

鼠疫耶爾森菌探針法qPCR 陽性對照(1*10EB拷貝/ul)

50 μL黃蓋

使用手冊

1


【運輸及保存】

低溫運輸,-20℃保存,保存期限為 12 個月。


【自備試劑】樣品 DNA。


【注意事項】

一、稀釋標準曲線樣品 10E2-10E7 拷貝/μL 6 10 倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原, 本產品不提供活體樣品做陽性對照,只提供無傳染性的 DNA 片段作為陽性對照。

1. 標記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。

2.       用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液,最好用帶芯槍頭,下同)。

3.       在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照(試劑盒提供),充分震

蕩 1 分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。

4.       換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。

5.       換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。

6.       重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。

二、樣品 DNA 的制備

7.       如果有 N 個樣品,最好設置 N+2 個提取,多出的一個是 PC(樣品制備陽性

對照),一個是 NC(樣品制備陰性對照)??梢杂?10μL 陽性對照的 10000倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為PC。另外用水作為 NC。

8.       用自選方法純化樣品的 DNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù) DNA/提取試劑盒兼容。

三、Probe qPCR 反應(20μL 體系,在樣品制備室進行)

9.       如果做定量分析并且只做 1 次重復,則標記 N+9 個 PCR 管,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,1 個用于 PCR 陰性對照(用水做模板),6 個用于標準曲線。如果做定性分析,并且只做 1 次重復,則標記 N+4 個 PCR 管,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,1 個用于 PCR 陰性對照(用水做模板),1 個用于 PCR 陽性對照(用第 4 號管的陽性對照稀釋液做模板)。下面只以定量分析為例描述操作步驟。

10.       在標記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復。樣品管和陰性對照設  置完畢后才設置陽性對照,并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好

后最后加):


成分

樣品管

N+2

PCR

性對照管

標準曲線

樣品管(2-7 管)

2×Probe qPCR MagicMix

10 μL

10 μL

10 μL

鼠疫耶爾森菌 qPCR 探針

1 μL

1 μL

1 μL

鼠疫耶爾森菌探針法 qPCR 引物

混合液

2 μL

2 μL

2 μL

N+2 個待測 DNA 模板

7 μL

-

-

超純水

-

7 μL

-

7 步所得標準曲線樣品稀釋液

2-7 號)

 

-

 

-

7 μL2 號樣到 2 號管,3 號樣到 3

號管












11.     蓋上蓋子后上機,按下面參數(shù)進行 PCR:

過程

溫度

時間

預變性

95℃

3 min

PCR 反應

40 個循環(huán))

95℃

15sec

60℃

1 min(采集 FAM 通道的熒光

信號)

四、數(shù)據(jù)處理

12.     如果把本試劑盒用于定量檢測,則以陽性對照濃度的 log 值為橫軸,以 Ct 值為縱軸,繪制標準曲線。再以待測樣品的 Ct 值從標準曲線上推算出樣品RNA 濃度的 log 值,再推算出其濃度。

13.     如果把本試劑盒用于定性檢測,只判斷陽性或陰性,則陰性對照 Ct 必須大于或等于 40。陽性對照必須有熒光對數(shù)增長,有典型擴增曲線,Ct 值應該小于或等于 30。對待測樣品,如果其 Ct 大于或等于 40 則為陰性,如果小于或等于 35 則為陽性。如果在 35-40 之間,則重復一次。若重復結果 Ct 值

小于 40,擴增曲線有明顯起峰,該樣本判斷為陽性,否則為陰性。

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