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人肺炎克雷伯菌病IgM抗體(KPN IgM)酶聯(lián)免疫分析試劑盒說明書

發(fā)布時(shí)間:2023/3/5      點(diǎn)擊次數(shù):1215

人肺炎克雷伯菌病IgM抗體(KPN IgM)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書

本試劑盒僅供研究使用。

                                                                    96T

使用目的:

本試劑盒用于測定人血清,血漿及相關(guān)液體樣本中肺炎克雷伯菌病IgM抗體(KPN IgM)表達(dá)。

實(shí)驗(yàn)原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗原夾心法測定標(biāo)本中人肺炎克雷伯菌病IgM抗體(KPN IgM)表達(dá)。用純化的抗原包被微孔板,制成固相抗原,可與樣品中肺炎克雷伯菌病IgM抗體(KPN IgM)相結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后再與HRP標(biāo)記的抗原結(jié)合,形成抗原-抗體-酶標(biāo)抗原復(fù)合物,經(jīng)過徹di洗滌后加底物TMB顯色。TMBHRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),與CUTOFF值相比較,從而判定標(biāo)本中人肺炎克雷伯菌病IgM抗體(KPN IgM)的存在與否。

試劑盒組成

1

30倍濃縮洗滌液

20ml×1

7

終止液

6ml×1

2

酶標(biāo)試劑

6ml×1

8

陽性對照

0.5ml×1

3

酶標(biāo)包被板

12孔×8

9

陰性對照

0.5ml×1

4

樣品稀釋液

6ml×1

10

說明書

1

5

顯色劑A

6ml×1

11

封板膜

2  

6

顯色劑B

6ml×1/

12

密封袋

1個(gè)


標(biāo)本要求

1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。


操作步驟

1.         編號:將樣品對應(yīng)微孔按序編號,每板應(yīng)設(shè)陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)

2.         加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,

3.         溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  

4.         配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5.         洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。

6.         加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。

7.         溫育:操作同3。

8.         洗滌:操作同5。

9.         顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.

10.     終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

11.     測定:以空白孔調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

計(jì)算和結(jié)果判定:

試驗(yàn)有效性:陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.20

 臨界值(CUT OFF)計(jì)算:臨界值=陰性對照孔平均值+0.15

 陰性判定:樣品OD< 臨界值(CUT OFF)者為人肺炎克雷伯菌病IgM抗體(KPN IgM)陰性

 陽性判定:樣品OD臨界值(CUT OFF)者為人肺炎克雷伯菌病IgM抗體(KPN IgM)陽性。


注意事項(xiàng)

1.操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行,本試劑不同批號組分不得混用。

2.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

    3.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。

  4.  封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

    5.底物請避光保存。

    6.試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn),使用雙波長檢測時(shí),參考波長為630nm

7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為2M的硫酸,使用時(shí)必須注意安全。


保存條件及有效期

1.試劑盒保存:2-8。

2.有效期:6個(gè)月



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