尿素氮（BUN）試劑盒說(shuō)明書(shū)

 微量法100T/96S

注    意：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

測(cè)定意義

尿素是生物體內(nèi)含氮化合物分解的終產(chǎn)物，在尿酶催化下分解轉(zhuǎn)化成氨。血液尿素氮是腎功能的主要指標(biāo)之一。

測(cè)定原理

樣本中尿素氮在氯化高鐵一磷酸溶液中與二乙酰一肟和硫胺脲共煮，生成一種紅色的二嗪化合物，其顏色的深淺與尿素氮含量成正比，采用二乙酰一肟法測(cè)定尿素氮含量。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器

天平、研缽、常溫離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋。

試劑組成和配制    

試劑一：液體6mL×1瓶，4℃避光保存，

試劑二：液體60mL×1瓶，4℃避光保存。

樣品處理

1.        組織：按照質(zhì)量（g）：蒸餾水體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱(chēng)取約0.1g，加入1mL蒸餾水）加入蒸餾水，勻漿后于25℃，10000g離心10min，取上清待測(cè)。

2.        細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（10⁴個(gè)）：蒸餾水體積（mL ）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1mL蒸餾水），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后4℃，10000g離心10min，取上清置于冰上待測(cè)。

3.        血清或其它液體：直接檢測(cè)。

測(cè)定操作

混勻，沸水浴10min，冷卻后，540nm下測(cè)定吸光值。△A=A測(cè)定-A空白。空白管只要做一管。

尿素氮含量計(jì)算：

a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定回歸方程為y =2.048x + 0.0229，R² = 0.9943；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL），y為吸光值。

1、按照血清（漿）或者細(xì)胞培養(yǎng)液體積計(jì)算

尿素氮含量(mg/mL)= (△A-0.0229)÷2.048=0.4882×(△A-0.0229)

2、按照樣本質(zhì)量計(jì)算

尿素氮含量mg/g鮮重)= (△A-0.0229)÷2.048×V樣總÷W=0.4882×(△A-0.0229)÷W

3、按照蛋白濃度計(jì)算

尿素氮含量(mg/mg prot)= (△A-0.0229)÷2.048÷Cpr=0.4882×(△A-0.0229) ÷Cpr

V樣總：加入提取液體積，1 mL； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；

b.用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定回歸方程為y = 1.024x + 0.0229，R² = 0.9943； x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL），y為吸光值。

1、按照血清（漿）或者細(xì)胞培養(yǎng)液體積計(jì)算

尿素氮含量(mg/mL)= (△A-0.0229)÷1.024=0.9766×(△A-0.0229)

2、按照樣本質(zhì)量計(jì)算

尿素氮含量(mg/g鮮重)= (△A-0.0229)÷1.024×V樣總÷W=0.9766×(△A-0.0229)÷W

3、按照蛋白濃度計(jì)算

尿素氮含量(mg/mg prot)= (△A-0.0229)÷2.048÷Cpr=0.9776×(△A-0.0229) ÷Cpr

V樣總：加入提取液體積，1 mL； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500萬(wàn)。