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尿素氮(BUN)試劑盒說明書

發(fā)布時(shí)間:2023/4/6      點(diǎn)擊次數(shù):458

尿素氮(BUN)試劑盒說明書

 微量法100T/96S

   意:正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

測(cè)定意義

尿素是生物體內(nèi)含氮化合物分解的終產(chǎn)物,在尿酶催化下分解轉(zhuǎn)化成氨。血液尿素氮是腎功能的主要指標(biāo)之一。

測(cè)定原理

樣本中尿素氮在氯化高鐵一磷酸溶液中與二乙酰一肟和硫胺脲共煮,生成一種紅色的二嗪化合物,其顏色的深淺與尿素氮含量成正比,采用二乙酰一肟法測(cè)定尿素氮含量。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器

天平、研缽、常溫離心機(jī)、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋。

試劑組成和配制    

試劑一:液體6mL×1瓶,4℃避光保存,

試劑二:液體60mL×1瓶,4℃避光保存。

樣品處理

1.        組織:按照質(zhì)量(g):蒸餾水體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g,加入1mL蒸餾水)加入蒸餾水,勻漿后于25℃,10000g離心10min,取上清待測(cè)。

2.        細(xì)胞:按照細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):蒸餾水體積(mL )為500~10001的比例(建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1mL蒸餾水),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時(shí)間3min);然后4℃,10000g離心10min,取上清置于冰上待測(cè)。

3.        血清或其它液體:直接檢測(cè)。

測(cè)定操作


空白管

測(cè)定管

樣品(μL


20

H2OμL

20


試劑一(μL

50

50  

試劑二(mL

500

500

混勻,沸水浴10min,冷卻后,540nm下測(cè)定吸光值。A=A測(cè)定-A空白??瞻坠苤灰鲆还?。

尿素氮含量計(jì)算:

a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定回歸方程為y =2.048x + 0.0229R2 = 0.9943;x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(mg/mL),y為吸光值。

1、按照血清(漿)或者細(xì)胞培養(yǎng)液體積計(jì)算

尿素氮含量(mg/mL)= (A-0.0229)÷2.048=0.4882×(A-0.0229)

2、按照樣本質(zhì)量計(jì)算

尿素氮含量mg/g鮮重)= (A-0.0229)÷2.048×V樣總÷W=0.4882×(A-0.0229)÷W

3、按照蛋白濃度計(jì)算

尿素氮含量(mg/mg prot)= (A-0.0229)÷2.048÷Cpr=0.4882×(A-0.0229) ÷Cpr

V樣總:加入提取液體積,1 mL Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mLW:樣本質(zhì)量,g

b.96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定回歸方程為y = 1.024x + 0.0229,R2 = 0.9943 x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(mg/mL),y為吸光值。

1、按照血清(漿)或者細(xì)胞培養(yǎng)液體積計(jì)算

尿素氮含量(mg/mL)= (A-0.0229)÷1.024=0.9766×(A-0.0229)

2、按照樣本質(zhì)量計(jì)算

尿素氮含量(mg/g鮮重)= (A-0.0229)÷1.024×V樣總÷W=0.9766×(A-0.0229)÷W

3、按照蛋白濃度計(jì)算

尿素氮含量(mg/mg prot)= (A-0.0229)÷2.048÷Cpr=0.9776×(A-0.0229) ÷Cpr

V樣總:加入提取液體積,1 mL; Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;500:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),500萬(wàn)。



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