无码人妻精品一区二区三区9厂_久久狠狠色噜噜狠狠狠狠97_浪荡女天天不停挨cao日常视频_国产精品成人aaaaa网站_精品一区二区三区自拍图片区

您好!歡迎訪問(wèn)優(yōu)利科(上海)生命科學(xué)有限公司網(wǎng)站!
全國(guó)服務(wù)咨詢熱線:

15021281375

當(dāng)前位置:首頁(yè) > 資料下載 > 丙酮酸羧化酶(PC)試劑盒說(shuō)明書

丙酮酸羧化酶(PC)試劑盒說(shuō)明書

發(fā)布時(shí)間:2023/10/26      點(diǎn)擊次數(shù):414

丙酮酸羧化酶PC)試劑盒說(shuō)明書

                                     微量法100/96


    意:正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

測(cè)定意義:

丙酮酸羧化酶(pyruvate carboxylasePC,EC 6.4.1.1)廣泛存在于動(dòng)物、霉菌和酵母的線粒體中,催化丙酮酸、ATP、CO2和水生成草酰乙酸、ADPPi,是糖異生過(guò)程的第一個(gè)限速酶,在保證血糖的動(dòng)態(tài)平衡方面起著重要的作用。

 

測(cè)定原理:

PC催化丙酮酸、ATP、CO2和水生成草酰乙酸、ADPPi,蘋果酸脫氫酶進(jìn)一步催化草酰乙酸和NADH生成蘋果酸和NAD+,在340nm下測(cè)定NADH氧化速率,即可反映PC活性。

 

需自備的儀器和用品:

分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

 

試劑的組成和配制:

提取液:100mL×1瓶,4保存;

試劑一:液體18 mL×1瓶, 4保存;

試劑二:液體13uL×1支,4保存;

試劑三:粉劑×1支,-20保存;

試劑四:粉劑×1支,-20保存;

 

樣本的前處理

組織、細(xì)菌或細(xì)胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離:

1、   稱取約0.1g組織或收集500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞,加入1mL提取液,用冰浴勻漿器或研缽勻漿。

2、   將勻漿600g,4離心5min。

3、   棄沉淀,將上清液移至另一離心管中,11000g,4離心10min。

4、   上清液即胞漿提取物,可用于測(cè)定從線粒體泄漏的PC(此步可選做)。

5、   在步驟④的沉淀中加入1mL提取液,超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3秒,間隔10秒,重復(fù)30次),用于線粒體PC活性測(cè)定。

 

測(cè)定步驟:

1、  分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340nm,蒸餾水調(diào)零。

工作液的配制:臨用前將試劑二和試劑三轉(zhuǎn)移到試劑一中混合溶解待用;置于37℃(哺乳動(dòng)物)25(其它物種)預(yù)熱5分鐘;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。

試劑四的配制:在試劑四瓶中加入1mL蒸餾水充分溶解待用;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。

2、   在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL樣本、10μL試劑四和180μL工作液,立即混勻,記錄340nm處初始吸光值A1 2min后的吸光值A2,計(jì)算ΔA=A1-A2

 

注意:在該試劑盒中,若ΔA大于0.5,需將樣本用提取液稀釋適當(dāng)倍數(shù)后測(cè)定,使ΔA小于0.5可提高檢測(cè)靈敏度。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。

 

PC活性計(jì)算:

a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

1)按樣本蛋白濃度計(jì)算

單位定義:每mg組織蛋白每分鐘消耗1nmol NADH定義為一個(gè)酶活力單位。

PCnmol/min/mg prot)=[ΔA×V反總÷ε×d×109]÷(V×Cpr) ÷T=1608×ΔA÷Cpr

2)按樣本鮮重計(jì)算

單位定義:每g組織每分鐘消耗1 nmol NADH定義為一個(gè)酶活力單位。

PCnmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V反總÷ε×d×109]÷(W ×V÷V樣總)÷T=1608×ΔA÷W

3)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算:

單位定義:每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗1 nmol NADH定義為一個(gè)酶活力單位。

PCnmol/min/104 cell)=[ΔA×V反總÷ε×d×109]÷(500×V÷V樣總)÷T=3.215×ΔA

V反總:反應(yīng)體系總體積,2×10-4 L;εNADH摩爾消光系數(shù),6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V樣:加入樣本體積,0.01 mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時(shí)間,2 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mLW:樣本質(zhì)量,g;500:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),500萬(wàn)。

 

b.96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

1)按樣本蛋白濃度計(jì)算

單位定義:每mg組織蛋白每分鐘消耗1nmol NADH定義為一個(gè)酶活力單位。

PCnmol/min/mg prot)=[ΔA×V反總÷ε×d×109]÷(V×Cpr) ÷T=3216×ΔA÷Cpr

2)按樣本鮮重計(jì)算

單位定義:每g組織每分鐘消耗1 nmol NADH定義為一個(gè)酶活力單位。

PCnmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V反總÷ε×d×109]÷(W ×V÷V樣總)÷T=3216×ΔA÷W

3)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算:

單位定義:每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗1 nmol NADH定義為一個(gè)酶活力單位。

PCnmol/min/104 cell)=[ΔA×V反總÷ε×d×109]÷(500×V÷V樣總)÷T=6.43×ΔA

V反總:反應(yīng)體系總體積,2×10-4 L;εNADH摩爾消光系數(shù),6.22×103 L / mol /cmd96孔板光徑,0.5cm;V樣:加入樣本體積,0.01 mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時(shí)間,2 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mLW:樣本質(zhì)量,g;500:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),500萬(wàn)。


文件下載    圖片下載    
優(yōu)利科(上海)生命科學(xué)有限公司
地址:金大公路8218號(hào)1幢
郵箱:1431486511@qq.com
傳真:
關(guān)注我們
歡迎您關(guān)注我們的微信公眾號(hào)了解更多信息:
歡迎您關(guān)注我們的微信公眾號(hào)
了解更多信息
午夜精品久久久久久| 亚洲精品成人a在线观看| 国产亚洲精品久久久久久久久动漫| 国产精品无码久久久久成人影院| 最近中文字幕视频高清| 久久亚洲日韩精品一区二区三区| 人人狠狠综合久久亚洲| 性做久久久久久免费观看| 国产成人亚洲日韩欧美| 影视先锋av资源噜噜| 精品无码人妻一区二区免费蜜桃| 男女性杂交内射妇女bbwxz| 国产精品白丝av嫩草影院| 国产无遮挡裸体免费视频在线观看| 国产精品无套内射迪丽热巴| 亚洲va欧美va天堂v国产综合| 日本大肚子孕妇交xxx| а√天堂资源官网在线资源| 凸凹人妻人人澡人人添| 亚洲成色在线综合网站| 胸大美女又黄的网站| 国产精品久久久久久妇女| 男人扒女人添高潮视频| 男人女人做爽爽18禁网站| 又黄又爽又无遮挡免费的网站| 樱花草在线播放免费中文| 亚洲日韩欧美一区久久久久我| 日本免费人成视频播放| 久久久久久久久蜜桃| 亚洲精品乱码久久久久久蜜桃不卡| 国产成人小视频| 国产免费福利在线视频| 免费无码av片流白浆在线观看| 无码乱人伦一区二区亚洲| 国产乱对白刺激视频| 亚洲精品成人片在线观看| 免费a级毛片18禁网站免费| 伴郎粗大的内捧猛烈进出视频观看| 日本护士毛茸茸高潮| 国产av电影区二区三区曰曰骚网| 久久精品一区二区三区中文字幕|