无码人妻精品一区二区三区9厂_久久狠狠色噜噜狠狠狠狠97_浪荡女天天不停挨cao日常视频_国产精品成人aaaaa网站_精品一区二区三区自拍图片区

您好!歡迎訪問優(yōu)利科(上海)生命科學有限公司網(wǎng)站!
全國服務咨詢熱線:

15021281375

當前位置:首頁 > 資料下載 > ATP含量試劑盒說明書

ATP含量試劑盒說明書

發(fā)布時間:2023/10/31      點擊次數(shù):396

ATP含量試劑盒說明書

微量法100/48

 

    意:正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定

測定意義:

ATP廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中,是生物能量通貨,能荷是描述細胞能量代謝狀態(tài)的主要參數(shù)。測定ATP含量并且計算能荷,能夠反映能量代謝狀態(tài)。

 

測定原理:

肌酸激酶催化肌酸和ATP反應生成磷酸肌酸,可在700nm下用磷鉬酸比色法檢測磷酸肌酸含量,以此反應ATP含量。

 

自備儀器和用品:

分光光度計/酶標儀、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、微量石英比色皿/96孔板、研缽和蒸餾水。

 

試劑組成和配制:

酸性提取液:液體60mL×1瓶,4保存;

堿性提取液:液體60mL×1瓶,4保存;

試劑一:粉劑×1支,4保存;臨用前加入1mL蒸餾水充分溶解待用;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復凍融。

試劑二:液體1.5mL×1支,4保存;

試劑三:粉劑×1瓶,4保存;臨用前加入500μL蒸餾水充分溶解待用;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復凍融。

試劑四:液體5mL×1瓶,4保存;

試劑五:液體25mL×1瓶,4保存;

標準液:液體10mL×1瓶,2μmol/mLATP標準液,4保存;

 

ATP提取

1、血清(漿)中ATP的提?。喊凑昭澹{)體積(mL):酸性提取液體積(mL)為15~10的比例(建議取約0.1mL血清(漿),加入1mL酸性提取液),進行冰浴勻漿,8000g 4 離心10min;取上清液至另一EP管中,加入等體積的堿性提取液使之中和,混勻,8000g 4 離心10min,取上清,置冰上待測(不可用于蛋白質(zhì)含量測定)。

2、組織中ATP的提取:按照組織質(zhì)量(g):酸性提取液體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL酸性提取液),進行冰浴勻漿,8000g 4離心10min,取上清至另一EP管中,加入等體積的堿性提取液使之中和,混勻,8000g 4 離心10min,取上清,置冰上待測(不可用于蛋白質(zhì)含量測定)。

3、細胞或細菌中ATP的提取:先收集細胞或細菌到離心管內(nèi),棄上清,按照細菌或細胞數(shù)量(104個):酸性提取液體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬細菌或細胞加入1mL酸性提取液),超聲波破碎1min(冰浴,強度20%或200W,超聲2s,停1s),8000g 4 離心10min;取上清液至另一EP管中,加入等體積的堿性提取液使之中和,混勻,8000g 4 離心10min,取上清,置冰上待測(不可用于蛋白質(zhì)含量測定)。

 

測定步驟:

1、分光光度計或酶標儀預熱30 min以上,調(diào)節(jié)波長到700nm,蒸餾水調(diào)零。

2、顯色劑的配制:臨用前請根據(jù)擬用顯色劑體積(樣本數(shù)×0.2 m L),按試劑四(mL):試劑五(mL=15的比例配制。用多少配多少。

 

3、樣本測定:

試劑名稱(μL)

測定管

對照管

標準管

空白管

樣本

10

10



標準液



10

10

試劑一

20


20


試劑二

10

10

10

10

試劑三

10


10


蒸餾水


30


30

充分混勻,37準確水浴30min

顯色劑

200

200

200

200

37水浴20min后,700nm下測定各管吸光值

注意空白管和標準管通常只需要各做一個。每個測定管設一個對照管。

 

ATP含量計算:

1、血清(漿)中ATP含量計算

ATP含量(μmol/mL)=[C標準管×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管) ×V1]÷(V3×V1÷V2)=40×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管)

2、組織、細菌或細胞中ATP含量計算

1)按蛋白濃度計算

ATP含量(μmol/mg prot)=[C標準管×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管) ×V1(V1÷Cpr=2×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管)÷Cpr

蛋白質(zhì)含量需要另外測定。

2)按樣本鮮重計算

ATP含量(μmol/g鮮重)=[C標準管×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管) ×V1(W×V1÷V2)=4×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管)÷W

3)按細菌或細胞密度計算

ATP含量(μmol/104 cell=[C標準管×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管) ×V1(500×V1÷V2)=0.008×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管)

C標準管:標準液濃度,2μmol/mL;V1:加入反應體系中樣本體積,0.01mL;V2加入提取液體積,2mL;V3:加入血清(漿)體積:0.1mL;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL W:樣本質(zhì)量,g;500:細胞或細菌總數(shù),500萬。

注意:Z低檢測限為10nmol/mL10nmol/g鮮重或0.1nmol/mg prot


文件下載    圖片下載    
優(yōu)利科(上海)生命科學有限公司
地址:金大公路8218號1幢
郵箱:1431486511@qq.com
傳真:
關注我們
歡迎您關注我們的微信公眾號了解更多信息:
歡迎您關注我們的微信公眾號
了解更多信息
性欧美videofree高清极品| 久久99亚洲网美利坚合众国| 久久久久久国产精品无码超碰动画| 同性男男黄g片免费网站| 久久久久亚洲av无码网站| 亚洲国产成人精品无码区宅男?| 门国产乱子视频观看| 老师露双奶头无遮挡挤奶视频| 无码精品a∨在线观看十八禁| 无码日韩精品一区二区免费| 日韩一欧美内射在线观看| 丰满少妇被猛男猛烈进入久久| 欧美猛男军警gay自慰| 久久成人国产精品免费软件| 欧美黑人乱大交| 色欲香天天天综合网站| 日本精品人妻无码免费大全| 国产乱人伦偷精品视频免下载| 无码丰满少妇2在线观看| 欧美白人最猛性xxxxx| 国产精品偷伦视频免费观看了| 九九re6热在线视频精品66| 国产午夜亚洲精品午夜鲁丝片| 99久久99久久精品免费看蜜桃| 大胸美女被吃奶爽死视频| 精精国产xxxx视频在线播放| av亚洲产国偷v产偷v自拍| 久久精品国产亚洲av麻豆图片| 无码国产精品一区二区色情男同| 午夜免费啪视频在线观看| 午夜成人理论无码电影在线播放| 亚洲av无码国产精品色午夜| 亚洲加勒比久久88色综合| 亚洲一区二区女搞男| 狠狠色噜噜狠狠狠狠97首创麻豆| 日韩av无码一区二区三区不卡毛片| 国产麻豆天美果冻无码视频| 国产精品人妻久久ai换脸| 色综合视频一区二区三区| 少妇高潮惨叫久久久久久| 色8激情欧美成人久久综合电影|